Выполните лабораторную работу «Каталитическая активность ферментов (на примере амилазы)» на с. 201.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 5 «Каталитическая активность ферментов (на примере амилазы)»
Цель: доказать каталитическое действие белков-ферментов, показать их высокую специфичность, а также зависимость их действия от условий среды.
Оборудование: штатив с пробирками, мерный цилиндр объемом 50 мл, пипетки, водяная баня или термостат, термометр.
Реактивы: лёд, 1 %-ный раствор крахмала, 1 %-ный раствор иода в иодиде калия (раствор Люголя), 5 %-ный раствор сульфата меди(II), 10 %-ный раствор гидроксида натрия, 2 %-ный раствор сахарозы, 0,2 %-ная соляная кислота, свежий 3 %-ный раствор пероксида водорода.
Ход работы:
- Приготовление раствора слюны, содержащего фермент амилазу.
— Тщательно прополощите рот водой.
— Наберите 2-4 мл слюны в мерный цилиндр.
— Добавьте в цилиндр воды до объема 10 мл.
- В две пронумерованные пробирки налейте по 10 капель раствора крахмала.
- В пробирку № 1 внесите четыре капли воды (контроль), а в пробирку № 2 — 4 капли раствора слюны.
- Перемешайте и поставьте на водяную баню или в термостат на 15 мин при температуре 37 °С.
- Из пробирки Nº 2 возьмите четыре капли исследуемого вещества и внесите их в две разные пробирки (по две капли в каждую). В одну из них добавьте каплю раствора иода в иодиде калия. В другую — каплю раствора сульфата меди (II) и четыре капли раствора гидроксида натрия и осторожно нагрейте до кипения. Те же действия проделайте с содержимым контрольной пробирки (№ 1).
- Оформите полученные результаты в виде таблицы.
- Сделайте вывод на основе проведенного исследования.
Результаты:
№ пробирки | Что добавили | Результат до нагревания | Результат после нагревания |
1 | капля раствора иода в иодиде калия | раствор окрашивается в синий цвет | раствор обесцвечивается |
капля раствора сульфата меди (II) и 4 капли раствора гидроксида натрия | раствор становится мутным | образуется осадок черного цвета | |
2 | капля раствора иода в иодиде калия | раствор окрашивается в красный цвет | раствор обесцвечивается |
капля раствора сульфата меди (II) и 4 капли раствора гидроксида натрия | раствор окрашивается в синий цвет | образуется желтый, красно-коричневый осадки |
Вывод: при добавлении капли раствора иода в иодиде калия в пробирку 1 образуется комплексное соединение, окрашивающее раствор в синий цвет. При добавлении капли раствора иода в иодиде калия в пробирку 2 происходит расщепление крахмала, раствор окрашивается в красный цвет. При добавлении капли раствора сульфата меди (II) и 4 капель раствора гидроксида натрия в пробирку 2 протекает качественная реакция между глюкозой и гидроксидом меди (II). При нагревании пробирки 2 с каплей раствора сульфата меди (II) и 4 каплями раствора гидроксида натрия амилаза слюны гидролизует крахмал.